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行业应用

药物营养保健食品化妆品类器官与PDX

化妆品舒缓功效实验方案

1、实验原理

皮肤刺激是指皮肤在受到刺激性物质作用时产生的一种反应，其主要表现为红肿，刺痛，瘙痒等症状，抑制刺激反应是评价原料舒缓功效的重要指标之一。刺激反应是一种生理应激反应，受各种伤害，如物理伤害、病原体、有毒化学物质暴露和紫外线照射激活诱导，各种刺激因子在急性和慢性刺激发生过程中扮演着关键角色。

巨噬细胞是天然免疫反应的重要效应细胞，细菌脂多糖（LPS）是刺激巨噬细胞释放刺激介质的有效物质。LPS与巨噬细胞表面抗原识别受体相结合，诱导巨噬细胞分泌促炎细胞因子（主要NF-κB介导转录的TNF-α、IL-6、IL-1β等）和刺激介质（如NO、PGE2）及相关酶类，进一步触发级联反应，最终导致组织损伤。LTB4（白三烯B4）是一种由花生四烯酸代谢产生的刺激介质，主要在白细胞如中性粒细胞中产生。LTB4能够促进炎症细胞的趋化、增殖和活化，参与多种刺激炎症性疾病的开展。

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图1.LPS诱导炎症反应的发生

角质细胞占表皮质量的95%，它们顺利获得自身之间的自分泌或旁分泌作用在皮肤生理学中发挥重要作用。紫外线辐射刺激皮肤产生过量的ROS，激活NF-κB和MAPK 信号通路，这两个途径促进激活蛋白-1（AP-1）和NF-κB的激活，随后调节MMPs的转录，促进了炎症因子IL-1β、L-1α、IL-6和TNF-α等的表达。

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图2.UV刺激诱导炎症反应的发生

TRPV1又称辣椒素受体，是一种配体门控非选择性阳离子通道，对钙离子有高度通透性。广泛存在于C类感觉神经传入纤维末梢及角质形成细胞、肥大细胞等细胞上，对皮肤正常生理功能的维持有重要作用。当接触到CAP、酸（pH< 6.0）和高温（> 43℃）等刺激时，TRPV1会被激活，进一步导致细胞内钙离子浓度增加，从而使皮肤出现瘙痒、刺痛等不适感。所以，TRPV1含量降低，能够减少皮肤不适感从而达到舒缓的作用。

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图3.CAP刺激TRPV1生成

肥大细胞是参与过敏反应的主要效应细胞，胞浆含有大量的嗜碱性颗粒，受到过敏原或者类过敏原刺激时，能够发生脱颗粒反应而释放多种生物介质，如胞内预合成的肝素、组胺、5-羟色胺、β-氨基己糖苷酶等以及细胞被激活后转录合成的肿瘤坏死因子、细胞因子等，引起局部水肿，从而使机体产生一系列的过敏反应和炎症。

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图5.肥大细胞脱颗粒示意图

本实验利用小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）/人永生化角质形成细胞（HaCaT）/大鼠嗜碱性白血病细胞系（RBL-2H3）构建实验模型，检测相关炎性介质含量，多维度评价样品是否具有舒缓功效。

2、检测项目

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3.检测流程

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4.部分结果展示

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图1.LTB4含量柱形图

与模型对照组比，***p<0.001

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图2.PGE2含量柱形图

与模型对照组比，***p<0.001

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图3.TNF-α基因相对表达量柱形图

与模型对照组比，***p<0.001

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图4.TLR4基因相对表达量柱形图

与模型对照组比，**p<0.01

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图5.组胺释放率柱形图

与模型对照组比，***p<0.001

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图6.NF-κB-WB典型图

1.正常对照组，2.模型对照组，3.阳性对照组

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图7.TRPV1免疫荧光典型图

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图8.肥大细胞脱颗粒典型图

5.结果描述

根据测试结果，与正常对照组比，模型对照组的LTB4，TNF-α，PGE2等含量显著上调，说明本次刺激条件有效；

与模型对照组比，阳性对照组的LTB4，TNF-α，PGE2等含量显著下调，说明本实验有效且可靠。

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